HUVEC细胞培养攻略
时间:2023-01-13 点击次数:3868
人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC)是脐静脉的重要构成细胞之一。当进行血管内皮细胞实验时,通常使用人脐静脉内皮细胞,而非静脉内皮细胞或动脉内皮细胞。永生化的HUVEC会通过慢病毒转染的方式携带RFP基因或GFP基因。
表1 HUVEC细胞基本信息
名称 |
HUVEC(人脐静脉内皮细胞) |
形态 |
上皮样 |
生长特性 |
贴壁 |
接种密度 |
8.0 x 103-3.0 x 104 viable cells/cm2 |
传代比率 |
1:2-1:3 |
图1 HUVEC(人脐静脉内皮细胞)
首先要讨论的是HUVEC的“嘴巴刁不刁”?
通常来说,HUVEC的“胃口”还是蛮“刁”的,营养需求很高,除了营养种类丰富的F12和必不可少的胎牛血清(如表2所示),肝素和血管内皮生长因子也是必须的。如图2所示,长势良好的HUVEC呈鹅卵石样,轮廓清晰,铺展均匀,一般2-3天可传代。
表2 为HUVEC精心准备的“食谱”
营养 |
含量 |
F12( abs9563) |
90% |
胎牛血清( abs981) |
10% |
肝素( abs47014863) |
终浓度0.1mg/mL |
ECGS血管内皮生长因子( abs04176) |
0.03-0.05ug/mL |
双抗( abs9244) |
1% |
图2 长势良好的HUVEC(人脐静脉内皮细胞)
其次要讨论一下为啥头天换液,第二天HUVEC无限细胞系突然出现空泡化?
如图3所示,严重空空泡化的HUVEC。这里要注意的是有限细胞系的空泡化往往是细胞凋亡的显著特征,与细胞本身状态有关。而无限细胞系空泡化通常与外界因素有管,有以下两种可能: 第一点是培养液的pH值与细胞正常所需pH值差别太大,导致细胞代谢异常,出现空泡化;第二点是在细胞培养过程中,由于血清浓度不够、药物作用、外界刺激等情况下导致细胞代谢出现问题,内质网应激状况下会出现细胞空泡化的情况。
图3 空泡化的HUVEC(人脐静脉内皮细胞)
解决细胞空泡化,通常有两种方法:
1. 测定完培的pH,看其酸碱性是否适宜。多数细胞适宜的pH范围为7.2-7.4。
2. 若培基或血清是开封存放很久的,可换用新鲜的完配给细胞换液;若都是新开封的,可换用新批次的基培或血配制培养液,给细胞换液观察。
最后要讨论的是如何解决HUVEC聚团问题,培养瓶尤其是培养板的亲水性较差时或血清中的促贴壁因子不足时,会导致HUVEC细胞聚团问题。
解决办法:培养瓶前一天用明胶( abs47051214)包被可有效预防HUVEC聚团。包被方法:以 T25 培养瓶为例,取5ml的明胶,加入培养瓶, 放置37℃条件下至少30分钟,然后用枪头将液体吸出即可。如图示4所示,是铺展均匀的HUVEC(人脐静脉内皮细胞)。
图4 正常贴壁,伸展均匀的HUVEC(人脐静脉内皮细胞)
本期讲解就到这里了,下一期您想了解哪种细胞的培养攻略呢?欢迎留言评论哦。如有细胞培养问题,欢迎扫码加我微信哦。
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✦培养简单 ✦扩增效率高 ✦维持稳定传代
货号 |
品名 |
规格 |
abs981 |
胎牛血清(特级) |
500ml |
abs972 |
胎牛血清(优级) |
500ml |
abs974 |
胎牛血清(标准级) |
500ml |
abs9483 |
高糖DMEM培养基 |
500ml |
abs9484 |
RPMI-1640培养基 |
500ml |
abs9505 |
MEM培养基 |
500ml |
abs9506 |
α-MEM培养基 |
500ml |
abs9554 |
Ham's F-12 |
500ml |
abs9561 |
DMEM/F-12培养基 |
500ml |
abs961 |
10×PBS缓冲液 |
500ml/500ml×10 |
abs962 |
PBS缓冲液 |
500ml |
abs970 |
D-PBS缓冲液(1×,无钙镁) |
500ml |
abs971 |
D-PBS缓冲液(含 Ca2+ Mg2+) |
500ml |
abs9257 |
Hanks平衡盐溶液(不含Ca2+ Mg2+,无酚红) |
500ml |
abs9258 |
Hanks平衡盐溶液(含Ca2+ Mg2+,无酚红) |
500ml |
abs47014938 |
胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%),含酚红 |
100ml |
abs47047375 |
胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%),不含酚红 |
100mL |
abs9479 |
无DMSO无血清细胞冻存液 |
100mL |
abs9417 |
无血清细胞冻存液 |
100mL |
abs9473 |
细胞冻存液(含血清) |
100mL |
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