凝胶成像及Quantity-One使用说明

GelDoc TM XR

The Discovery Series Quantity One® 1-D Analysis Software

使用说明书

昆明友宁科技有限公司

2008年9月

仪器各组成部分介绍

I Universal Hood（正面大体）II控制面板

镜头及滤

控制面板

紫外透

III 背面开关及保险丝

IV镜头及CCD

V Universal Hood内顶部

Universal Hood电

源开关（

ChemiDoc

GelDoc镜头

ChemiDoc

镜头滤光片选择杆

图像采集

用成像仪自带的荧光标尺和带刻度的透明塑料板，参照后文GelDoc XR成像的方法，按紫外透射、白光透射以及侧面白光三种模式分别采集一次图像。要求成像清晰、明暗适中。

凝胶切割

将抽屉式紫外透射平台完全拉开至最大，将待切割的样品放置其上。安装上有机玻璃保护屏，打开“Trans UV”和“Prep UV”。操作者戴上手套，站在保护屏后进行切胶操作。

注意事项：

1．安装ChemiDoc XRS的图像采集卡时，要先安装其驱动程序，再将图像采集卡插入；

2．如果软件的密码狗不能被正常识别，请安装带补丁的驱动程序或向Bio-Rad安装工程师求助；3．在给用户安装图像仪和软件前，先提醒用户保存好申请来的密码、软件序列号和密码狗。4．培训仪器时，提醒用户不要将潮湿的样品长期放在暗箱内，以防腐蚀滤光片，更不要将液体溅到暗箱底板上，以免烧坏主板。

5．提醒用户仪器用完，及时关上电源，特别是ChemiDoc XRS的CCD电源；

6．提醒用户勿用控制成像仪的电脑上网，也不要自行重装电脑操作系统或给操作系统升级。

第二部分仪器及Quantity One软件分析操作简介

凝胶电泳是每个做分子生物学的研究者天天都要打交道的基本技术。电泳之后的信息处理与电泳本身同样重要。目前有大量软件可以用于分析电泳结果，今天要向大家介绍的是Bio-Rad公司的1D凝胶分析软件Quantity One（Bio-Rad还有一个做2D凝胶分析的软件PDQuest）。Quantity One软件是常用1D凝胶分析软件中功能最强大，自动化程度最高的软件。这个软件的最新版本可以在Bio-Rad的网站（）免费下载，以供试用或用户升级之用。

Quantity One软件的主要功能包括定量分析(Volumes Quick Guide)，电泳条带分析(Band Analysis)，差显分析(Differential Display Analysis)，克隆计数(Colony Counting Analysis)等，此外，还可以直接控制Bio-Rad公司的各类图像仪和ExQuest自动切胶仪，使您的凝胶分析工作变得极为轻松。

Quantity One软件拥有与windows操作系统下绝大多数应用软件相同的友好界面。

插入密码狗，打开Quantity One软件，可以看到最上缘蓝色横条幅是标题栏，往下依次是菜单栏和工具栏。

每个菜单的主要功能如下：

File图像打开、保存、引入、打印等操作Match分子量估算、条带匹配分析

Edit图像普通编辑操作Volumn定量分析

View图像缩放、三维视图、看光密度值等操作Analysis浓度估算、克隆计数等分析

Image图像旋转、翻转、裁切等操作Reports分析结果输出

Lane泳道分析Window窗口分析

Band条带分析Help帮助、快捷菜单、软件注册等

往下一行是工具栏，上面每个按钮的功能见下表：

打开文件图像显示控制条带分析工具

保存操作显示条带匹配工具

打印图像去除分析标记轮廓修改工具

看全图图像工具打印快捷指南

局部放大文字工具定量分析快捷指南

拖曳定量工具条带分析快捷指南

放大并居中灰度分析工具克隆计数快捷指南

缩小并居中泳道分析工具

Quantity One软件Help Quick Guide快捷指南提示如何实现一个功能，如定量分析(Volumes Quick Guide)，电泳条带分析(Band Analysis)，差显分析(Differential Display Analysis)，克隆计数(Colony Counting Analysis)等。快捷指南下有1，2，3…步骤，根据提示完成。

使用Quantity One软件进行电泳结果分析，通常包括图像获取、图像优化、分析、结果输

出四部分，参考下图：

图像获取就是通过软件控制扫描仪（GS-800、PharosFX等）或凝胶成像系统（GelDoc、ChemiDoc、VersaDoc等）获取图像的过程。图像优化就是将扫描或拍照获得的原始图像进行初步处理，以便更好地进行后续分析。接下来是分析过程，根据分析的方法和目的不同，又可以分为定量分析、条带分析、克隆计数、差异（聚类）分析等等。不管如何分析，最终我们都必须通过软件的输出功能，得到我们想要的结果。Quantity One软件提供了多种结果输出方式。在接下来的几章里，我们将按照这个思路，一步步引导您使用这一软件。

图像获取

Quantity One －版本可以控制Bio-Rad目前几乎所有的图像仪，如GelDoc XR、ChemiDoc XRS等。这些图像仪采集到的图像，可以直接保存成软件可直接分析的图像，即扩展名1sc的原始图像文件。下面将具体介绍如何通过Quantity One软件从GelDoc XR获取图像。

GelDoc XR是Bio-Rad凝胶成像系统中最常用，操作最简便的仪器，它可以用来拍摄EB、SYBR Green 等染料染的核酸电泳凝胶；Sypro Ruby、银染、考马斯亮蓝等方法染的蛋白电泳凝胶；以及化学显色的印记膜等。

使用GelDoc XR之前，先接通电源，打开位于仪器背面右下角的电源开关；然后根据具体的应用选择合适的照明和滤光片位置。原则如下：