pCold-ProS2载体说明

pCold-ProS2

编号 载体名称

北京华越洋生物VECT4580 pCold-­‐ProS2

pCold-­‐ProS2载体基本信息

载体名称: pCold-­‐ProS2

质粒类型: 大肠杆菌表达载体

高拷贝/低拷贝: 高拷贝

启动子: C SPA

克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶

载体大小: 5025 b p

5' 测序引物及序列: pCold-­‐F：5'-­‐ACGCCATATCGCCGAAAGG-­‐3' 3' 测序引物及序列: pCold-­‐R：5'-­‐GGCAGGGATCTTAGATTCTG-­‐3' 载体标签: ProS2

载体抗性: 氨苄青霉素（Ampicillin）

筛选标记: -­‐-­‐

备注: -­‐-­‐

稳定性: -­‐-­‐

组成型: 诱导型表达

病毒/非病毒: 非病毒

pCold-­‐ProS2载体质粒图谱和多克隆位点信息

pCold-­‐ProS2载体简介

pCold P roS2 D NA 是一种融合的冷休克表达载体，使用来源于革兰氏阴性菌Myxococcus xanthus中的Protein S作为可溶性标签。这种Protein S存在于粘细菌的孢子衣中，由173个氨基酸残基组成，是一种非常稳定的可溶性蛋白质。将两个Protein S的N-­‐末端结构域串联，再结合ProS2 T ag的作用，就能使融合目的蛋白的稳定性和可溶性得到提高。此外，由于目的蛋白和ProS2-­‐Tag的相互作用性很低，因此可以将二者有效分离。 pCold P roS2 DNA Vector在cspA启动子的下游插入了5’非编码区(5’-­‐UTR)、翻译增强元件(TEE)、His-­‐Tag序列、ProS2-­‐Tag和多克隆位点(MCS)。在ProS2-­‐Tag和多克隆位点(MCS)之间主要是HRV3C P rotease、Thrombin和Factor X a的切断位点，用来消除融合蛋白质的标签。此外，在cspA启动子下游还插入了lac operator，可以严格调控目的基因的表达。由于本制品的启动子是大肠杆菌来源的，所以大部分大肠杆菌都可以作为表达宿主使用。总之，pCold P roS2 D NA V ector提供的冷休克技术，能够促进蛋白质的正确折叠，增加目的蛋白质的可溶性，对于一些棘手的目的蛋白质的表达是一个很好的选择。

pCold-­‐ProS2 载体复制子是 ColE1 o ri，质粒大小是 5025bp，带有 Ampicillin (氨苄青霉素)抗性，可转化进大肠杆菌 DH5α，通过带有 Ampicillin (氨苄青霉素)抗性平板筛选大量复制扩增，培养条件是 LB，37℃。pCold-­‐ProS2 载体的启动子是 CSPA，并带有有 lac 操纵子，能在大肠杆菌DE3 工程菌（建议用 BL21 D E3 或 Rosetta D E3）中，用 IPTG 诱导表达出重组蛋白，标签有 ProS2，可选用镍柱纯化。pCold-­‐ProS2 载体的多克隆位点有 HRV3C Protease、Thrombin 和 Factor Xa等酶切位点，可采用双酶切连接方法连接目的基因，如果没有合适的酶切位点，可采用无缝克隆或者联系我们重新改造该载体。

其他大肠杆菌表达载体：

pBV221 ptdTomato pET-52b(+) pAmCyan

pDsRed-Express2 pBV220 pCold-GST pColdS-SUMO

pCold TF pCold IV pCold III pCold II

pCold I pE-SUMO pCold-ProS2 pBAD102/D-TOPO

pBAD202/D-TOPO pACYC184 pBAD/Thio-TOPO pBad/Myc-His C pBad/Myc-His B pBad/Myc-His A pBad/His C pBad/His B pBad/His A pBAD-TOPO pET-23b(+) pET-23a(+)

pET-23c(+) pET-23(+) pET-12b(+) pET-12c(+)

pET-12a(+) pET-11b(+) pET-11a(+) pET-11c(+) pBad24 pQE-82L pQE-81L pQE-80L

pQE-32 pQE-9 pQE-16 pQE-31

pQE-60 pQE-70 pQE-40 pET-51b(+)

pET-50b(+) pET-49b(+) pET-48b(+) pET-47b(+)

pET-26b(+) pET-32a(+) pET-21b(+) pET-22b(+)

pET-14b pET-16b pET-15b pET-19b

pET-20b(+) pET-21d(+) pET-21c(+) pET-21b(+)

pET-21a(+) pET-24a(+) pET-24d(+) pET-25b(+)

pET-27b(+) pET-28a(+) pET-30a(+) pET-42a(+)

pET-43.1c(+) pET-43.1b(+) pET-43.1a(+) pET-44a(+)

pET-44c(+) pET-46 EK/LIC pET-37b(+) pTrcHis2 C pTrcHis2 B pTrcHis2 A pET303/CT-His pET302/NT-His pRSET-CFP pRSET-EmGFP pRSET-BFP pGFPuv

pET300/NT-DEST pET301/CT-DEST pGEM-T pBad43

pGEX-4T-3 pGEX-5X-2 pBlueScript SK(+) pG-Tf2

pG-KJE8 pGro7 pET-SUMO pSE380

pET-17b pET102/D-TOPO pCDFDuet-1 pMAL-p5x

pTf16 pET-28c(+) pBluescript II SK(+) pET-30b(+) pSUMO pProEX HTc pProEX HTb pProEX HTa pKD3 pKD13 pKD46 pTYB1

pTYB2 pTWIN2 pBluescript II KS(-) pTYB12

pMAL-p5e pACYCDuet-1 pEGM-11ZF(+) pEGM-7ZF(+) PinPoint Xa-3 PinPoint Xa-2 PinPoint Xa-1 pSP73

pSP64 pTWIN1 pTYB11 pTXB1

pET-5b(+) pBad/gIII C pBad/gIII B pBad/gIII A pET-5a(+) pMal-p4X pMal-p2G pkk223-3

pkk232-8 pCYB1 pEZZ18 pBAD18

pMAL-c5x pMal-p2E pMal-p2X pET-44 EK/LIC pET-43.1 EK/LIC pET-41 EK/LIC pMal-c4X pTrcHis B

pET-31b(+) pET-3b(+) pET-41a(+) pGEX-3X

pGEX-4T-2 pETDuet-1 pGEX-4T-1 pTrc99a

pET-28b(+) pET-His pALEX a,b,c pACYC177

pBR322 pKD4 pKD20 pMXB10

pEcoli-6xHN-GFPuv pKJE7 pRSET B pGEX-KG

pGEX-2T pRSFDuet-1 pCOLADuet-1 pTrcHis C pTrcHis A pET-41b(+) pET-42b(+) pET-3a(+) pGEX-6P-3 pGEX-6P-2 pGEX-6P-1 pGEX-5X-3 pGEX-5X-1 pGEX-2TK pRSET A pMal-c2G

pMal-c2E pMal-c2X pRSET C pQE-30