技术领域
本发明涉及农业领域，特别是涉及一种用于防治作物的土传病害的可湿性粉剂。
背景技术
哈茨木霉菌T-22是一种预防性的微生物杀菌剂，可以用于有机作物种植过程中，对根部病害有很好的防治效果，并且药效持续时间可达三个月，但是哈茨木霉菌T-22作为微生物制剂起效慢，并且预防使用效果比较好，发病之后见效慢。铜制剂既能防治真菌性病害，又能防治细菌性病害，既有保护作用，又有预防作用，且兼具一定的治疗和铲除作用，络氨铜是甘氨酸铜络合物，有效的降低普通铜制剂容易发生药害的问题，同样可以用于有机种植生产中。二者复配可以解决在实际农业生产中，单一使用一种制剂防治效果不佳的问题。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种防治效果好、防治谱广、安全无污染的含哈茨木霉菌T-22和络氨铜的可湿性粉剂及其制备方法和应用。
本发明涉及一种含哈茨木霉菌T-22和络氨铜的可湿性粉剂，所述可湿性粉剂包括哈茨木霉菌T-22和络氨铜。
优选地，所述可湿性粉剂中哈茨木霉菌T-22的含量为1×107～1×109CFU/g；络氨铜的含量为10～25wt％。
优选地，所述可湿性粉剂还包括润湿剂、分散剂和载体。
优选地，所述可湿性粉剂中润湿剂的含量为1～5wt％；所述分散剂的含量为1～5wt％；所述载体的含量为补足100wt％。
优选地，所述润湿剂包括木质素磺酸钠、2-萘磺酸甲醛聚合物钠盐(NNO)、脂肪醇聚氧乙烯醚(JFC)、十二烷基硫酸钠中的一种或多种。
优选地，所述分散剂包括2-萘磺酸甲醛聚合物钠盐(NNO)、聚乙二醇、脂肪醇聚乙二醇酯、纤维素钠、三聚磷酸钠中的一种或多种。
优选地，所述载体包括硅藻土、膨润土、高岭土、滑石粉、白炭黑中的一种或多种。
本发明还涉及一种含哈茨木霉菌T-22和络氨铜的可湿性粉剂的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：将除了哈茨木霉菌T-22的原料混合后粉碎，之后加入哈茨木霉菌T-22的孢子粉，再次混合均匀，即制得本发明的含哈茨木霉菌T-22和络氨铜的可湿性粉剂。
所述原料包括哈茨木霉菌T-22和络氨铜。
优选地，所述原料中哈茨木霉菌T-22的含量为1×107～1×109CFU/g；络氨铜的含量为10～25wt％。
优选地，所述原料还包括润湿剂、分散剂和载体。
本发明还涉及一种含哈茨木霉菌T-22和络氨铜的可湿性粉剂的应用，所述含哈茨木霉菌T-22和络氨铜的可湿性粉剂为权利要求1中所述可湿性粉剂，其用于防治作物的土传病害。
优选地，所述作物包括蔬菜、花卉、中药材、苗木、果树。
本发明含哈茨木霉菌T-22和络氨铜的可湿性粉剂及其制备方法和应用与现有技术不同之处在于：
1、本发明含哈茨木霉菌T-22和络氨铜的可湿性粉剂是一种复配制剂，对病害的防治谱增加，比单独的两种制剂的防治范围大并且效果更优，可以有效的防治各种病原菌引起的土传病害；并且复配的两种药剂均符合有机种植标准，复配后的制剂同样可以用于有机种植生产中，为有机种植生产提供了一种优质药剂。
2、本发明的产品将哈茨木霉菌T-22及络氨铜复配用于防治作物的土传病害，一次使用，可以有效的控制根部土传病害，增加防治效果，同时增加防治谱，对多种病原菌混发的土传病害起到很好的防治效果。
具体实施方式
通过以下实施例和验证试验对本发明的含哈茨木霉菌T-22和络氨铜的可湿性粉剂及其制备方法和应用作进一步的说明。
实施例
本实施例的含哈茨木霉菌T-22和络氨铜的可湿性粉剂按以下步骤制备：将除了哈茨木霉菌T-22的原料混合后粉碎，之后加入哈茨木霉菌T-22的孢子粉，再次混合均匀，即制得本发明的含哈茨木霉菌T-22和络氨铜的可湿性粉剂；原料如表1所示。
表1本实施例的含哈茨木霉菌T-22和络氨铜的可湿性粉剂原料
注：表中未填即为无。
验证试验
以下采用室内毒力测定和田间试验相结合的方法对本发明产品的防治效果进行验证。
试验对象：西瓜枯萎病(尖孢镰刀菌西瓜专化型)，中国农业微生物菌种保藏管理中心购买。
采用菌丝生长速率法测络氨铜对哈茨木霉菌T-22和尖孢镰刀菌的室内毒力，哈茨木霉菌T-22对尖孢镰刀菌的室内毒力；采用菌丝生长速率法测络氨铜和哈茨木霉菌T-22不同比例混剂对尖孢镰刀菌的室内毒力。
1、菌丝生长速率法测络氨铜对哈茨木霉菌T-22和尖孢镰刀菌的室内毒力
菌丝生长速率法试验方法：
含毒培养基的制备：将灭菌的PDA培养基加热融化，加入一定量的药剂溶液，混匀使之浓度达到所需测试的浓度，然后倒进培养皿中，直径为75mm的加入20mL，直径为90mm的加入25mL。
测定方法：本试验按照中华人民共和国农业行业标准(NY/T 1156.2-2006)，采用菌丝生长速率法进行测定。将培养好的哈茨木霉菌T-22，在无菌操作条件下用直径6mm的灭菌打孔器，自菌落边缘切取菌饼，用接种器将菌饼接种于含药平板中央，菌丝面向下，盖上皿盖，置于25℃培养箱中培养。一定时间后，用十字交叉法测量菌落直径。每个处理浓度设3个重复。
结果调查：根据空白对照培养皿中菌丝的生长情况调查病原菌菌丝生长情况，用卡尺测量菌落直径，每个菌落用用十字交叉法垂直测量直径各一次，然后几个重复再取平均值。
抑制率计算：根据调查结果，利用公式(1)(2)计算抑制率，单位为百分率
D＝D1-D2………………………………………………………………(1)
式中：
D—菌落增长直径；
D1—菌落直径；
D2—菌饼直径。
式中：
I—菌丝生长抑制率；
D0—空白对照菌落增长直径；
Dt—处理菌落增长直径。
EC50的计算：将病菌抑制率换成几率值并以此为y值，作为纵坐标，以浓度的对数值为横坐标，做毒力回归曲线，要求相关系数R2＞0.9。抑制率为50％时，y值为5.0，求此时的x值，并将x值求幂换算为浓度值，即为EC50值。
表2菌丝生长速率法测定络氨铜对哈茨木霉菌T-22的抑制作用
杀菌剂 毒力回归方程 EC50(μg/mL) 相关系数(R2) 络氨铜 y＝0.773x+1.906 10059.8 0.988
络氨铜对哈茨木霉菌T-22的抑制作用非常弱，二者复配络氨铜基本不会对哈茨木霉菌T-22产生抑制作用。
表3菌丝生长速率法测定络氨铜对尖孢镰刀菌的抑制作用
杀菌剂 毒力回归方程 EC50(μg/mL) 相关系数(R2) 络氨铜 y＝2.41x-0.949 294.1 0.978
2、哈茨木霉菌T-22对尖孢镰刀菌的室内毒力
取已知含量的哈茨木霉菌孢子粉，用蒸馏水依次配制成浓度为每mL含1×109、l×108、l×l07、1×106和1×105个孢子的菌悬液。分别取各浓度的哈茨木霉菌悬浮液2mL加入到已灭菌、温度约为40℃的18mL PDA中，制成含菌PDA平板。在平板中央接种一个经活化培养(25℃，3d)后的尖孢镰刀菌菌饼(直径＝6mm)。以PDA平板中加入灭菌水并接种尖孢镰刀菌的处理为空白对照，每浓度处理重复4次，试验重复3次。将PDA平板倒置于25℃恒温培养箱中培养3d后，十字交叉法测量尖孢镰刀菌菌落直径，计算抑制率(％)，计算EC50。
表4哈茨木霉菌T-22对尖孢镰刀菌的抑制作用
杀菌剂 毒力回归方程 EC50(个/mL) 相关系数(R2) 哈茨木霉菌T-22 y＝0.608x+1.702 2.66×105 0.965
3、菌丝生长速率法测定哈茨木霉菌与络氨铜联合对尖孢镰刀菌的抑制作用
络氨铜与哈茨木霉菌T-22不同比例混合，按照常规稀释倍数1000倍，测混合药剂对尖孢镰刀菌的抑制作用。
络氨铜10％、15％、20％、25％，稀释1000倍后浓度分别为100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL、250μg/mL。
哈茨木霉菌T-22 1×107CFU/g、2×107CFU/g、1×108CFU/g、3×108CFU/g，稀释后浓度1×104CFU/g、2×104CFU/g、1×105CFU/g、3×105CFU/g。
表4菌丝生长速率法测定络氨铜与哈茨木霉菌T-22联合对尖孢镰刀菌的抑制作用
4、25％络氨铜·3亿CFU/克哈茨木霉菌可湿性粉剂对西瓜枯萎病的田间药效
试验方法：西瓜种植1亩。药液稀释1000倍灌根，西瓜移栽后发病初期灌根，按每苗的用药量为200mL，共施药一次。试验期间未使用任何防治其他病虫害的药剂，选取单独灌25％络氨铜为对照组1和单独灌3亿CFU/克哈茨木霉菌可湿性粉剂为对照组2，灌清水为空白对照。
调查时间：空白对照小区出现明显病症时调查所有小区病苗数，于灌根后10天、20天各调查一次，共调查两次。
每小区随机五点取样，每点调查30左右株，调查西瓜苗的根部，记录枯萎病发病株数以及调查总株数。
试验结果
试验组防治效果为87.24％，对照组1防治效果为56.23％，对照组2防治效果为60.21，实验证明二者复配可以明显提高对西瓜枯萎病的防治效果。
本发明的使用方法如下：
拌土：哈茨木霉菌T-22与络氨铜的复配制剂400克拌土(基质)一立方米；
苗床喷淋：出苗后，将制剂稀释后喷淋使用，4～6g/m2；
单株灌根：制剂稀释1000倍，单株灌根，每株灌根100-200毫升。
本发明的产品为哈茨木霉菌T22与络氨铜的复配制剂可以用于蔬菜、花卉、中药材、苗木、果树等经济作物上，用于防治作物的土传病害。
虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是本领域的技术人员应当理解，这些仅是举例说明，本发明的保护范围是由所附权利要求书限定的。本领域的技术人员在不背离本发明的原理和实质的前提下，可以对这些实施方式作出多种变更或修改，但这些变更和修改均落入本发明的保护范围。